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电化学发光免疫分析法在评价治疗性单抗与FcγRⅠ结合活性中的应用
作者:徐刚领 郭莎 张峰 于传飞 王文波 王兰
关键词: 单克隆抗体; 贝伐珠单抗; 免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ(FcγRⅠ); 电化学发光免疫分析(ECLI); 结合活性;
摘要：目的:建立电化学发光免疫分析（electrochemiluminescence immunoassay,ECLI）测定贝伐珠单抗与免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ（FcγRⅠ）结合活性的方法,并评价贝伐珠单抗生物类似药（similar biotherapeutic products,SBP）候选物和其原研药（reference biotherapeutic product,RBP）与FcγRⅠ结合活性的相似性。方法:先使用封闭液对链霉亲和素（streptavidin,SA）预包被的96孔MSD板进行封闭,再将生物素（biotin）标记的FcγRⅠ与之结合,之后加入不同稀释倍数的贝伐珠单抗,最后加入SULFO-TAG(Ru（bpy）32+)标记的羊抗人检测抗体上机读数。按照试验设计分别对FcγRⅠ浓度、单抗样品初始浓度、倍比稀释倍数、检测抗体浓度等试验参数进行优化,并对优化后方法的准确性和精密性进行初步验证,还将建立的方法用于评价贝伐珠单抗SBP候选药和RBP与FcγRⅠ结合活性的相似性。结果:采用优化后的方法检测,贝伐珠单抗与FcγRⅠ的结合呈现良好的剂量效应曲线,R2>0.99。该方法具有较好的准确性和精密性,靶值为50%～150%样品的回收率在95.2%～103.7%之间;RSD均小于10%。贝伐珠单抗SBP候选药与FcγRⅠ的相对结合活性均在为RBP相对结合活性均值±3SD之间。结论:电化学发光免疫分析法能够用于评价抗体与FcγRⅠ的结合活性,并可应用于对SBP候选药和RBP与FcγRⅠ结合活性的相似性分析。该方法的灵敏度和准确性较好,为评价抗体与FcγRⅠ的结合提供了新的技术手段。