- · 关于举办第八届中国药学会药物检测质量管理学术研讨会的通知(第一轮)[12/25]
- · 关于召开2020年中国药学会中药资源专业委员会学术年会暨世界中医药学会联合会中药鉴定专业委员会第七届学术年会、世界中医药学会联合会药用植物资源利用与保护专业委员会第七届学术年会(线上)的通知(第三轮)[12/21]
- · 关于召开2020年中国药学会中药资源专业委员会学术年会暨世界中医药学会联合会中药鉴定专业委员会第七届学术年会、世界中医药学会联合会药用植物资源利用与保护专业委员会学术年会的通知[12/08]
- · 关于举办中国药学会第二十届中国药师周的通知(第三轮)[11/20]
- · 关于举办中国药学会第二十届中国药师周的通知(第二轮)[11/12]
- · 关于举办2020年全国大学生制药工程设计作品交流会的通知(第三轮)[11/12]
- · 关于举办第五届中国医疗器械警戒大会的通知(第二轮)[11/10]
- · 第六届《药学学报》药学前沿论坛暨第十五届中国药学会青年药学论坛(第二轮通知)[11/10]
基于报告基因的抗HER2单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立及应用
作者:刘春雨 王馨 于传飞 徐刚领 王兰
关键词: 抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体; 抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用; 生物学活性; 荧光素酶检测系统; 报告基因;
摘要:目的:利用转基因细胞法建立抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单抗的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性检测方法。方法:利用Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,SKBR3细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BioGloTM Luciferase Assay system)进行抗HER2单抗的ADCC生物学活性检测,同时对试验条件进行优化及方法学验证,并将该检测方法用于不同类型的抗HER2单抗ADCC效应的评价。结果:抗HER2单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D,方法经优化后确定靶细胞为SKBR3细胞,抗体稀释起始工作质量浓度为4 000 ng·mL-1,1∶4倍的稀释倍数,效靶比为15∶1,诱导时间为20 h。该方法具有良好的专属性;3次独立检测的板间、日间最大诱导倍数(fold of induction,FI)及半数有效浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC50)的RSD均小于10%; 4个不同稀释组回收率样本经3次测定,相对效价分别为(46.27±2.01)%、(71.18±1.55)%、(133.17±9.91)%以及(166.55±15.73)%;对应的回收率分别为(92.53±4.01)%、(94.91±2.07)%、(106.54±7.93)%、(111.04±10.48),RSD均小于10%,且该方法也适用于不同变性程度及各类抗HER2单抗的ADCC效应评价。结论:本研究利用转基因细胞法成功建立抗HER2单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗HER2单抗ADCC生物学活性的常规检测方法。
上一篇:均相时间分辨荧光法测定抗PD-1/PD-L1单抗药物活性
下一篇:成像毛细管等电聚焦电泳分析单克隆抗体电荷异质性的方法学验证及系统适用性对照品的制备