糖基化修饰对重组CTLA4-Ig稳定性影响的研究

作者:朱磊单改仙王兰

关键词: 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4抗体融合蛋白; 融合蛋白; 单抗类药物; 糖基化修饰; 稳定性; N-糖基化; O-糖基化;

摘要：目的:探讨糖基化修饰对细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4抗体融合蛋白(CTLA4-Ig)融合蛋白稳定性的影响。方法:应用多种糖苷酶N-糖苷酶F(PNGase F)、内切糖苷酶F2(EndoF2)、唾液酸酶(neuraminidase)和O-糖苷酶(O-glycosidase)对样品进行处理。通过分子排阻色谱(SEC)测定不同酶切时间处理后样品纯度变化;应用差示扫描荧光(DSF)测定样品整体热力学参数的变化;应用差示扫描量热(DSC)测定样品各结构域热力学参数变化;在45℃条件下加热,分别于0、1、3、5、7、9、11和12周取样,通过SEC测定样品纯度的变化。结果:在N-糖苷酶F、内切糖苷酶F2和唾液酸酶分别处理过程中,CTLA4-Ig的聚体含量逐渐增加,而O-糖苷酶酶切过程中,聚体虽无明显变化,但碎片含量逐渐增加;经DSF测定,N-糖苷酶F和内切糖苷酶F2处理后解链温度(T_m)均明显下降,而唾液酸酶和O-糖苷酶处理后T_m无明显变化;经DSC测定,N-糖苷酶F和内切糖苷酶F2处理后T_m1下降,T_m2不变,T_m3上升,而唾液酸酶处理后T_m1和T_m3都略微有所上升,T_m2基本不变,O-糖苷酶处理后T_m值均变化;加速试验过程中,N-糖苷酶F和唾液酸酶处理样品的聚体上升,内切糖苷酶F2处理样品的的聚体不变;O-糖苷酶处理样品的的聚体不变,而碎片偏高。结论:通过多种分析手段研究发现,糖基化修饰与CTLA4-Ig的稳定性密切相关。

上一篇：成像毛细管等电聚焦电泳分析单克隆抗体电荷异质性的方法学验证及系统适用性对照品的制备
下一篇：双特异性抗体研发进展

糖基化修饰对重组CTLA4-Ig稳定性影响的研究

作者:朱磊 单改仙 王兰

关键词: 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4抗体融合蛋白; 融合蛋白; 单抗类药物; 糖基化修饰; 稳定性; N-糖基化; O-糖基化;

作者:朱磊单改仙王兰