- · 关于举办第八届中国药学会药物检测质量管理学术研讨会的通知(第一轮)[12/25]
- · 关于召开2020年中国药学会中药资源专业委员会学术年会暨世界中医药学会联合会中药鉴定专业委员会第七届学术年会、世界中医药学会联合会药用植物资源利用与保护专业委员会第七届学术年会(线上)的通知(第三轮)[12/21]
- · 关于召开2020年中国药学会中药资源专业委员会学术年会暨世界中医药学会联合会中药鉴定专业委员会第七届学术年会、世界中医药学会联合会药用植物资源利用与保护专业委员会学术年会的通知[12/08]
- · 关于举办中国药学会第二十届中国药师周的通知(第三轮)[11/20]
- · 关于举办中国药学会第二十届中国药师周的通知(第二轮)[11/12]
- · 关于举办2020年全国大学生制药工程设计作品交流会的通知(第三轮)[11/12]
- · 关于举办第五届中国医疗器械警戒大会的通知(第二轮)[11/10]
- · 第六届《药学学报》药学前沿论坛暨第十五届中国药学会青年药学论坛(第二轮通知)[11/10]
建立雌酮硫酸钠胶体金免疫层析快速限量检测方法
作者:巩月红 段新宇 王建华 赵军 罗俊 温浩 高晓黎
关键词: 雌酮硫酸钠; 半抗原; 免疫原; 偶联率; 细胞融合; 杂交瘤细胞; 单克隆抗体; 胶体金免疫层析法;
摘要:目的:建立一种快速检测孕马尿中雌酮硫酸钠的胶体金免疫层析试纸方法。方法:采用化学合成法将雌酮制备为ESS-17-肟(半抗原),应用混合酸酐法将ESS-17-肟与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备为ESS-17-肟-BSA(免疫原),对所得偶联物溶液进行紫外扫描鉴定并计算偶联率。ESS-17-肟-BSA免疫BALB/C小鼠,取血清高滴度小鼠脾脏淋巴细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,用ELISA法进行阳性筛选。获得阳性克隆细胞株后于BALB/C小鼠体内诱生腹水制备单克隆抗体,抗体纯化后用胶体金标记,通过正交设计确定最佳实验参数,研制出雌酮硫酸钠胶体金免疫层析试纸条。结果:获得经化学结构修饰后的目标抗原ESS-17-肟-BSA,融合克隆后得到4株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株2D1、7G4、5F3、2A7,其中2D1抗体纯化后特异强,效价达1.0×106。该抗体制备的胶体金层析试纸条的检测限为1μg·L-1,与结构类似物均无交叉反应,此法检测样品结果与高效液相色谱法测定结果比对阳性符合率为85.45%(45/52),阴性符合率为89.58%(43/48),总符合率为88.00%(88/100),结果一致性较好。结论:本研究制备了雌酮硫酸钠免疫原,融合制得抗雌酮硫酸钠特异性单克隆抗体,并研制出以雌酮硫酸钠单克隆抗体为基础的胶体金免疫层析试纸条,能够快速、灵敏地检测孕马尿中的雌酮硫酸钠。