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发酵类脂溶性药物中残留DNA检测关键影响因素——溶剂的筛选与确定
作者:王琰 张培培 崔生辉 姚尚辰 胡昌勤 许明哲 张彦民
关键词: 发酵类脂溶性药物 环孢素 两性霉素B 残留DNA 测定影响因素 溶剂筛选 质量控制
摘要:目的:考察不同溶剂对发酵类脂溶性药物中残留DNA测定准确性的影响并确定最佳溶剂。方法:以脂溶性药物-环孢素为例,通过研究DNA检测全过程中各步骤溶解因素对检测结果的影响,从供试品溶液制备、供试品溶液与DNA试剂盒试剂相溶性及DNA溶液稳定性3个方面入手,对不同种类的溶剂进行考察和筛选,并根据荧光染色法的原理,采用Qubit■DNA检测试剂盒对环孢素供试品溶液中残留DNA进行测定,探讨溶剂选择的适用性和合理性。此外,应用筛选的溶剂对另一种脂溶性药物——两性霉素B中残留DNA进行了测定,进一步验证可靠性。结果:0.1 mol·L^-1盐酸-N,N-二甲基甲酰胺(1∶4)、0.1 mol·L^-1醋酸-N,N-二甲基甲酰胺(1∶4)和0.1 mol·L^-1柠檬酸-N,N-二甲基甲酰胺(1∶4)3种混合溶剂对脂溶性药物均有较好溶解性并能与DNA试剂较好相溶;进一步的DNA稳定性研究结果显示,0.1 mol·L^-1柠檬酸-N,N-二甲基甲酰胺(1∶4)对DNA结构与性质不产生影响,稳定性最好。结论:采用0.1 mol·L^-1柠檬酸-N,N-二甲基甲酰胺(1∶4)作溶剂,不仅对环孢素和两性霉素B具有较好的溶解性,而且对DNA不产生影响,稳定性较高,可实现终产品中残留DNA的准确测定。本文研究结果为脂溶性药物中残留DNA检测溶剂的选择提供了一定科学参考。
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