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应用CE-LIF方法分析重组人1型单纯疱疹病毒的DNA限制酶酶切片段
作者:李响 胡金盼 李永红 任挺钧 陈泓序 周勇 饶春明
关键词: 重组人1型单纯疱疹病毒; DNA限制酶酶切; 荧光标记; 激光诱导荧光检测; 毛细管电泳;
摘要：目的:建立毛细管电泳-激光诱导荧光（CE-LIF）检测方法,对重组人1型单纯疱疹病毒（rHSV-1）的DNA限制性酶切片段进行分析。方法:以rHSV-1为研究对象,用核酸提取仪提取其DNA,以DNA限制性内切酶NdeⅠ酶切,以SYBRTM Gold nucleic acid作为荧光标记物,利用CE-LIF实现分离检测,通过DNA ladder计算片段大小。CE-LIF条件:采用涂层毛细管（有效长度30 cm,总长度40 cm,内径100μm）,3.45 kPa压力进样3 s;毛细管分离温度设为25℃,毛细管分离电压为-7 kV,分离时间40 min;LIF检测器的激发波长及发射波长分别为488 nm和520 nm。结果:新建方法可以对8个目标酶切片段分离检测,各片段峰迁移时间的RSD（n=6）均小于0.35%,片段峰1～7校正峰面积百分比的RSD（n=6）均小于5.6%,方法精密度良好。通过DNA ladder回归方程,对DNA酶切产物进行片段大小的计算,各片段大小计算结果 RSD（n=6）均小于5.8%,且与琼脂糖凝胶电泳法测得结果相一致。结论:本研究建立的rHSV-1的DNA限制酶酶切片段CELIF分析法自动化程度高,灵敏度高,重复性好,试剂消耗及环境污染小,适用于rHSV-1的鉴别分析。