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重组9型腺相关病毒基因组滴度测定方法的改进和初步验证
作者:郑红梅 李永红 胡金盼 史新昌 于雷 饶春明
关键词: 重组9型腺相关病毒; 基因治疗载体; 实时荧光定量PCR技术; 基因组滴度; 平行线法; 同质对照品; 精密度;
摘要：目的:对重组9型腺相关病毒（rAAV-9）基因组滴度测定方法进行优化和初步验证,提高测定结果的精密度。方法:通过比较SDS和EDTA及不同浓度SDS的裂解效果,对病毒裂解方法进行优化;通过比较质粒和病毒分别做对照品时的测定结果,选择合适的对照品;通过比较平行线法和传统单点法的分析结果,选择合适的统计方法。结果:SDS裂解效果显著高于EDTA,终浓度为0.1%的SDS裂解效果最佳;以病毒为对照品,采用平行线法进行统计分析的结果变异度最小（RSD为13.7%）,优于质粒做对照品的检测结果（RSD为35.9%）及单点法的分析结果（RSD为23.1%）。结论:本方法优于传统的重组腺相关病毒基因组滴度测定方法,可应用于以rAAV-9为载体的基因治疗药物的质量控制。